MC3T3-E1 Subclone 14 冻存液配置

细胞冻存液怎么配

10%-15%（常见为10%）的DMSO或甘油，含10%-20%血清的冻存培养液。

一般来讲血清含量可以在10%-90%之间调整，冻存液中加入血清一方面可以为细胞提供营养，另一方面可以在细胞冻存过程中提供非渗透性保护物质，如蔗糖，白蛋白等从而更好地保护细胞。

有人亲测10%血清冻存细胞，结果证明是可以的，但高血清比例的冻存液更有助于提高细胞活力，此外娇贵的细胞可以适当提高冻存液中血清的比例以保证获得更高的存活率及活力。

扩展资料

细胞冻存和复苏的原则：

慢冻速融，这样更加有利于保持细胞的活力。冻存细胞不加任何保护剂，会导致细胞内冰晶的产生，从而使细胞产生内源性的机械损伤，引起细胞内环境渗透压，PH，电解质等的改变，进而促使细胞死亡。

常用的冻存保护剂为二甲基亚砜（DMSO）和甘油，冻存细胞时加入保护剂，一方面可以提高细胞膜对水的通透性，另一方面使冰点降低，延缓冻结过程。

缓慢冻存细胞的过程中，加入保护剂可以使细胞内水分渗出到细胞外，一定程度上减少胞内冰晶的产生，而在快速复苏细胞的过程中，能使胞外冰晶迅速融化，防止水分渗入胞内再次形成冰晶而损伤细胞。

参考资料来源：百度百科-细胞冻存

冻存液的配制需要水浴加热吗

不需要。
1、配置含10%DMSO或凡士林、10～20%小牛血清的冻存细胞培养液。
2、取对数成长期的体细胞，除去旧细胞培养液，用PBS清理。
3、除去PBS，添加适量蛋白酶(遮盖细胞培养皿表层)把单面生长发育的体细胞消化吸收出来。
4、抽滤1000rpm，5min。

求细胞冻存液的主要作用及成分。越全越好。。

作用：可保护细胞免受溶液损伤和冰晶损伤。

渗透性冷冻保护剂：可以渗透到细胞内，一般是一些小分子物质，主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。

非渗透性冷冻保护剂：不能渗透到细胞内，一般是些大分子物质，主要包括聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及羟乙基淀粉等。

冷冻保护剂同溶液中的水分子结合，发生水合作用，弱化水的结晶过程使溶液的粘性增加从而减少冰晶的形成，同时冷冻保护剂可以通过在细胞内外维持一定的摩尔浓度，降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度，使细胞免受溶质的损伤。

渗透性冷冻保护剂的保护机制是在细胞冷冻悬液完全凝固之前，渗透到细胞内，在细胞内外产生一定的摩尔浓度，降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度，从而保护细胞免受高浓度电解质的损伤同时。细胞内水分也不会过分外渗，避免了细胞过分脱水皱缩。

扩展资料：

保护剂使用注意

1．从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液。

2．将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤。

3．冻存和复苏最好用新配制的培养液。

参考资料来源：百度百科——冻存保护剂

参考资料来源：百度百科——细胞冻存

冻存液中的DMSO用什么配置？是用双蒸水吗？浓度是10%吗？

是纯的DMSO，通常在整个冻存液中的比例为10% 通常冻存液的配置方法是20%血清，10%DMSO，70%培养液 我一般用90%血清+10%DMSO，这个方法复苏后细胞的存活率非常高，推荐试一下。

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细胞冻存液的作用是将活细胞冻存后，长期保存。 一般配置冻存液有两种配方 1. 培养基，血清，DMSO配比为7：2：1 2. 血清，DMSO配比为9：1

标签：化学 理工学科 未分类 细胞 生活常识