您好！请教His标签及蛋白洗脱问题。感谢！

ni-nta纯化his标签蛋白的洗脱方法有哪些

Ni-NTA纯化His标签蛋白的洗脱方法 结合缓冲液：20mM磷酸纳，0.25M NaCl，10mM咪唑，pH7.4 洗脱缓冲液：20mM磷酸纳，0.25M NaCl，500mM咪唑，pH7.4

可溶性蛋白的纯化方法...详细的，我的用的无血清培养基，带His标签，问下怎么纯化，感谢

用镍柱镍柱分离纯化 固定金属离子亲和柱主要用于金属螯化离子。位于许多蛋白中的组氨酸残基将会和许多金属离子，例如锌。铜，镍，铁等形成复合物。因此，该柱料能选择性螯合一些具有组氨酸残基的蛋白质。但是半胱氨酸和咯氨酸残基也能和固定化金属螯和。但是亲和力比组氨酸要弱。所以，结合的强度是和缓冲液的PH和金属离子决定的。 金属螯和柱料主要是由亚氨基的乙酰乙酸成分耦联琼脂糖柱料，借助醚长生7个原子的空间。 全部容量：24-30um的含有zn的干胶 柱料结构：6%的高铰链的琼脂糖 柱料大小：45-165um 平均微粒：90um 直流速度：25度/0.1MPa/30倍柱床/5厘米高度/每小时可达700厘米 最大

Ni-NTA纯化His标签蛋白的洗脱方法有哪些

Ni-NTA纯化His标签蛋白的洗脱方法 结合缓冲液：20mM磷酸纳，0.25M NaCl，10mM咪唑，pH7.4 洗脱缓冲液：20mM磷酸纳，0.25M NaCl，500mM咪唑，pH7.4

用镍柱纯化带his标签的蛋白，蛋白过镍柱时忘记加wash buffer就加elute buffer,

意思是没有先用wash buffer清洗镍柱，就直接用elute buffer洗脱了么。这样的话洗脱效果会比较差一些，洗脱的蛋白纯度会明显降低。 虽然his标签的蛋白结合镍柱时特异性非常高，但因为种种原因总会有一些杂蛋白非特异性吸附在柱子上，所以要先用wash buffer冲洗掉这部分杂蛋白，再用elute buffer洗脱，已达到最好的纯化效果。

用Ni亲和层析柱纯化His标签融合蛋白时需要注意哪些事项

不是绝对的，两种方法其实都差不多。但是柱切和洗脱后酶切还是有不同的。柱切比较方便，酶切之后直接收流穿的部分就是目的蛋白。缺点是在洗脱之前不知道蛋白产量，可能努力了半天什么都没有，而且有些蛋白不稳定，可能在柱切过程中沉淀在柱子上了。洗脱后再切，比较直观的检测初步富集的蛋白量，再决定加多少酶，而且能直观的检测酶切效率，确定是酶切之后要多一个去标签的过程。

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